Bio-Rad 1658033 小型垂直电泳转印系统科研应用指南

——高效、紧凑的蛋白/核酸分离与转印一体化解决方案

一、系统核心特性与创新设计

1.1 ?？榛榧杓?/p>

电泳槽：

最大支持 10 cm × 10 cm 凝胶（2块，厚度0.5-1.5 mm）

冷却芯设计（温升＜5℃/小时，200V条件下）

转印?？椋?/p>

半干转/湿转双模式切换

最大转印效率：＞90%（测试蛋白10-150 kDa）

1.2 关键性能参数

参数1658033系统常规小型系统

最大电压500 V300 V

运行时间（SDS-PAGE）35分钟（200 V）50-60分钟

转印面积20 cm210-15 cm2

缓冲液需求量300 mL（电泳）500 mL

1.3 适用研究场景

推荐应用：

? 快速蛋白筛查（如CRISPR编辑验证）

? 低丰度核酸检测（Northern blot）

? 教学实验室高通量操作

二、标准化操作流程

2.1 电泳步骤

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1. 凝胶安装：

- 将预制胶卡入槽体，加入1×Running Buffer

- 避免缓冲液溢出（液面超过电极1 cm）

2. 上样：

- 使用10 μL上样枪头（最大上样量25 μL/孔）

3. 运行：

- 初始电压80 V（浓缩胶），进入分离胶后调至120-150 V

2.2 半干转印方案

步骤条件注意事项

膜/滤纸预处理浸渍转印缓冲液10秒避免气泡滞留

"三明治"组装负极→滤纸/胶/膜/滤纸→正极戴手套操作

转印参数15 V, 30分钟分子量＞100 kDa需延长至45分钟

三、性能优化与问题排查

3.1 电泳质量评估

合格标准：

? 蛋白Marker条带清晰（无弥散）

? 前沿指示剂（溴酚蓝）呈直线迁移

3.2 转印效率验证

Ponceau S染色法：

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1. 转印后膜用0.1% Ponceau S染色5分钟

2. 脱色后观察：

- 合格：所有目标条带可见

- 失败：高分子量蛋白缺失（需延长转印时间）

3.3 常见问题诊断

现象可能原因解决方案

条带弯曲缓冲离子强度不均新鲜配制Running Buffer

转印后信号弱甲醇浓度过高（＞20%）降低至10%甲醇

凝胶熔融电流过高/冷却失效检查冷却循环系统

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否用于非变性蛋白电泳？

需改用 Native PAGE缓冲液套装（Cat. 1610738），并取消SDS

Q2：最小检测蛋白量？

配合高敏发光底物（如Clarity Max）可检测 0.5 pg/band

文档优化建议：

插入 【电泳-转印工作流程图】 标注关键参数

添加 缓冲液配方二维码（链接至Bio-Rad数据库）

关键步骤用 ??警示框 强调（如"勿使用氯化钠缓冲液"）