Biocolor F2000 弹性蛋白检测试剂盒科研应用指南

——定量组织与细胞外基质中弹性蛋白的精准方案

一、检测原理与产品优势

1.1 比色法检测机制

特异性结合：试剂含 磺酸化四唑鎓盐，与弹性蛋白的 非极性氨基酸残基（如Val, Pro, Gly）选择性结合，形成 紫色复合物（λmax=513nm）。

动态范围：0.2-50 μg弹性蛋白/样本（R2>0.99），灵敏度 0.1 μg（优于ELISA法）。

1.2 试剂盒核心组分

组分编号 名称 作用与特性

F2000-A 提取缓冲液 含0.25M NH?OH，溶解交联弹性纤维

F2000-B 染色试剂 避光保存，反应后OD值与浓度呈线性

F2000-C 洗涤液 含0.1% SDS，降低非特异性吸附

1.3 适用样本类型

推荐样本：

? 皮肤/血管组织匀浆（建议≤50mg湿重）

? 细胞培养上清（需10倍浓缩）

? 病理切片（需配合显微分光光度计）

二、标准化实验流程

2.1 样本前处理

组织提取协议：

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1. 取20mg组织加入500μL F2000-A  

2. 95℃加热2小时（释放交联弹性蛋白）  

3. 12,000g离心10分钟，取上清检测  

细胞样本处理：

使用 F2000-A 裂解后，需通过 10kDa超滤管 浓缩

2.2 检测步骤

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1. 加样：  

  - 标准品/样本各100μL至96孔板（建议复孔）  

2. 染色：  

  - 加入50μL F2000-B，37℃避光振荡30min  

3. 洗涤：  

  - 用F2000-C冲洗3次（每次200μL）  

4. 检测：  

  - 513nm测OD值（参考波长650nm）  

2.3 数据计算

标准曲线拟合（示例）：

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浓度(μg)   OD513-OD650  

0           0.012  

5           0.328  

10          0.701  

→ 拟合方程：y=0.068x + 0.011 (R2=0.998)  

三、性能验证与问题排查

3.1 质量控制指标

合格标准：

? 空白孔OD值<0.05

? 标准曲线R2≥0.98

? 批内CV<8%（n=3）

3.2 典型应用数据

案例1：皮肤衰老研究

年轻vs年老小鼠真皮：

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年轻组：12.3±1.2 μg/mg组织  

年老组：6.8±0.9 μg/mg组织（p<0.01）  

案例2：药物干预效果

TGF-β抑制剂处理组：

弹性蛋白合成增加 2.4倍（vs对照组）

3.3 故障诊断表

现象 可能原因 解决方案

标准曲线线性差 染色时间不足 延长反应至45分钟

样本OD值超出范围 未充分提取 增加加热时间至3小时

背景值过高 增加至5次洗涤

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否检测弹性蛋白降解产物？

可检测 α-弹性蛋白（使用F2000-A提?。?，但需注意 elastin peptides 需专用抗体检测

Q2：与Masson染色相关性？

比色法结果与 Verhoeff染色 阳性面积显著相关（r=0.89, p<0.001），但与Masson染色无直接可比性

文档优化建议：

插入 【标准曲线示例图】（含95%置信区间）

添加 组织提取操作视频 二维码

关键步骤标注 ??注意（如"避免使用金属器械"）