Western 及 IP 裂解液的實際應用案例
更新時間：2025-08-14 點擊次數(shù)：44
癌癥研究中的蛋白表達分析
在探究乳腺癌細胞中特定致癌基因的表達調(diào)控機制時，研究人員運用 Western 及 IP 裂解液對乳腺癌細胞系進行處理。通過使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解液，在低溫環(huán)境下裂解細胞，有效防止了蛋白質的降解和修飾，確保所提取蛋白質的完整性與活性。經(jīng)裂解、離心獲取細胞總蛋白后，利用 Western Blot 技術分析目標致癌蛋白的表達水平。實驗結果顯示，相較于正常乳腺細胞，乳腺癌細胞中該致癌蛋白的表達量顯著上調(diào)，且其磷酸化修飾程度也發(fā)生明顯改變。這一成果為深入理解乳腺癌的發(fā)病機制提供了關鍵線索，為后續(xù)開發(fā)針對該致癌蛋白的靶向治療藥物奠定了基礎。
神經(jīng)科學領域的蛋白質相互作用研究
科研團隊在研究神經(jīng)退行性疾?。ㄈ绨柎暮Ｄ。┫嚓P蛋白的相互作用網(wǎng)絡時，IP 裂解液發(fā)揮了重要作用。以研究 β - 淀粉樣蛋白（Aβ）與 tau 蛋白的相互關系為例，實驗人員首先使用溫和型 IP 裂解液處理神經(jīng)元細胞或腦組織樣本。這種裂解液能夠在保持蛋白質天然構象的前提下，破壞細胞結構，釋放細胞內(nèi)蛋白。隨后，利用針對 Aβ 蛋白的特異性抗體進行免疫沉淀實驗，從復雜的蛋白混合物中富集與 Aβ 相互作用的蛋白質，其中就包括 tau 蛋白。通過對免疫沉淀復合物的進一步分析，發(fā)現(xiàn) Aβ 與 tau 蛋白的異常結合會導致 tau 蛋白過度磷酸化，進而促進神經(jīng)纖維纏結的形成，這一關鍵發(fā)現(xiàn)為揭示阿爾茨海默病的病理進程提供了重要依據(jù)，有助于開發(fā)新的治療策略來阻斷這一有害的蛋白相互作用過程。
免疫學研究中的抗體開發(fā)與鑒定
在開發(fā)針對新型病原體的單克隆抗體過程中，Western 及 IP 裂解液用于篩選和鑒定具有高特異性和親和力的抗體。研究人員將病原體感染細胞或表達病原體相關抗原的細胞作為研究對象，采用 Western 裂解液裂解細胞，獲得包含病原體抗原的總蛋白提取物。通過 Western Blot 實驗，將不同克隆的單克隆抗體與總蛋白提取物進行反應，篩選出能夠特異性識別目標抗原的抗體克隆。同時，利用 IP 裂解液進行免疫沉淀實驗，驗證篩選出的抗體與抗原在細胞內(nèi)環(huán)境中的真實結合能力，進一步評估抗體的質量和有效性。經(jīng)過多輪篩選和鑒定，成功獲得了針對該病原體關鍵抗原的高效單克隆抗體，為后續(xù)的免疫診斷試劑開發(fā)和疫苗研究提供了有力工具。
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