如何判断TrypLE Express酶的消化效果？

显微镜下观察细胞形态：在酶消化过程中及终止消化后，将培养皿置于倒置显微镜下观察，是判断消化效果最直观的方法。若细胞贴壁紧密时，呈多边形或不规则形状，相互连接成片。随着消化进行，理想的消化效果表现为细胞逐渐变圆，从培养皿表面松动，部分细胞开始悬浮。若细胞过度消化，会出现细胞膜破裂、细胞碎片增多的现象；若消化不足，则细胞仍大量贴壁，仅有少量细胞变圆。通过观察细胞形态变化，可及时判断消化程度，并调整消化时间 。例如，观察 HeLa 细胞消化情况时，当约 80% - 90% 的细胞变圆，且轻轻晃动培养皿有细胞开始脱离时，说明消化效果较好；若大部分细胞仍紧密贴壁，表明消化时间不足；若视野中出现大量破碎的细胞残片，则意味着过度消化。

检测细胞活力：细胞活力是衡量消化效果的关键指标，直接关系到后续实验的成败。常用的检测方法如台盼蓝染色法，活细胞由于细胞膜完整，能排斥台盼蓝而不被染色，死细胞则因细胞膜通透性增加，被染成蓝色。通过计数染色细胞与未染色细胞的比例，可计算细胞活力。正常情况下，经 TrypLE Express 酶合理消化后的细胞，活力应保持在 90% 以上。此外，还可采用 CCK - 8、MTT 等方法检测细胞代谢活性，间接反映细胞活力。若消化过程对细胞造成较大损伤，细胞活力会显著下降，影响后续细胞培养、增殖、分化等实验 。

评估细胞回收率：细胞回收率反映了消化过程中细胞的损失程度。在消化完成后，收集所有细胞悬液，通过细胞计数（如使用血细胞计数板或自动细胞计数仪）计算回收的细胞数量，并与消化前的细胞数量对比，得出细胞回收率。一般来说，较高的细胞回收率意味着消化过程对细胞的损伤较小，消化效果良好。若细胞回收率过低，可能是消化时间过长、酶浓度过高导致细胞损伤，或是消化不充分，部分细胞未能从培养表面有效解离 。

观察细胞再贴壁及生长情况：将消化后的细胞接种到新的培养器皿中，观察细胞的再贴壁及后续生长情况，也是判断消化效果的重要依据。消化效果好的细胞，在接种后 2 - 4 小时内开始贴壁，24 小时后细胞基本贴壁，并呈现出正常的生长形态，开始增殖。若细胞贴壁缓慢，或贴壁后形态异常、生长缓慢，甚至出现大量死亡，说明消化过程可能对细胞造成了不良影响，导致细胞功能受损，影响其正常的生长和增殖能力 。

分析细胞表面标志物表达：对于一些对细胞表面标志物要求较高的实验，如细胞分选、免疫细胞研究等，可通过流式细胞术检测细胞表面标志物的表达情况来判断消化效果。TrypLE Express 酶若消化过度，可能会破坏细胞表面抗原决定簇，导致标志物表达降低或丢失。通过对比消化前后细胞表面标志物的表达水平，若标志物表达无明显变化，表明消化过程未对细胞表面结构造成严重破坏，消化效果良好；反之，则说明消化条件可能需要优化 。