如何正确使用UElandy PCR清洁试剂盒？

准备工作：在开始使用 UElandy PCR 清洁试剂盒前，要先确认实验设备和试剂状态。对于负压法，需正确连接负压装置，并将 96 孔 DNA 制备板置于其上；若采用离心法，则准备好离心机和配套的 96 孔 1.6 ml 深孔板。同时，按试剂瓶上指定体积，往 Buffer W2 concentrate 中加入无水乙醇（可用无水乙醇或 95% 乙醇），并充分混合均匀，以此获得用于洗涤的 Buffer W2 。

结合反应：在 PCR、酶切、酶标或测序反应液中，加入 3 倍体积的 Buffer PCR - A。如果 Buffer PCR - A 的用量不足 100μl，需将其加至 100μl。随后，充分混合均匀，确保反应液与 Buffer PCR - A 融合。接着，将混合液转移到 96 孔 DNA 制备板中。对于负压法，开启负压装置，并调节负压至 - 25 - 30 英寸汞柱，缓慢吸掉板中的溶液，促使 DNA 牢固结合在硅胶膜上；离心法则是将 96 孔 DNA 制备板置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中，以 1000 x g 离心 1 min，弃去滤液，实现 DNA 与硅胶膜的结合 。

洗涤步骤：向 96 孔 DNA 制备板中加入 0.3 ml Buffer W2。负压法下，再次开启负压吸尽管中溶液；离心法是以 1000 x g 离心 1 min，弃去滤液。此洗涤步骤需重复两次，从而清除结合在硅胶膜上的盐分及其他小分子杂质 。

干燥处理：负压法需保持负压状态，将 96 孔 DNA 制备板抽吸 10 min，尽量去除残留液体，之后将导流管朝下，在长纤维性纸巾上用力拍击 6 次，进一步排除可能残留的液体；离心法是将 96 孔 DNA 制备板再次置于 96 孔 1.6 ml 深孔板中，以 3000 x g 离心 10 min，尽可能去除残留液体，为后续洗脱做准备 。

洗脱 DNA：将 96 孔 DNA 制备板置于 96 孔 V 型底板上，在膜正中央加入 25 - 30μl 水或 Eluent，室温静置 1 min，使洗脱液充分浸润硅胶膜。随后，以 3000 x g 离心 5 min，将纯化后的 DNA 洗脱到 V 型底板中。此时，便可获得高纯度的 PCR 产物，用于后续的限制性酶切、连接反应、分子杂交以及自动化荧光测序等实验 。

注意事项：使用过程中，务必严格按照试剂盒说明书进行试剂添加与操作条件控制。比如，Buffer W2 concentrate 使用前加入无水乙醇的操作必须准确无误；进行洗脱时，若将洗脱液或水加热至 65℃，能够有效提高洗脱效率；考虑到 DNA 分子呈酸性，建议将纯化后的 DNA 保存在 2.5 mM Tris - HCl，pH 8.5 的洗脱液中，以维持 DNA 的稳定性 。