TrypLE™ Express Enzyme (1X)—高效温和的细胞消化解决方案

概述（Introduction）

细胞消化（Cell Dissociation）是细胞培养中的关键步骤，尤其在贴壁细胞传代（Passaging）或细胞收获（Harvesting）时。传统的胰蛋白酶（Trypsin）虽然常用，但其动物来源（如猪或牛胰脏提?。┛赡艿贾屡渭洳钜?，且过度消化可能损伤细胞。

Thermo Fisher Scientific 的 TrypLE™ Express Enzyme (1X), Phenol Red-Free 提供了一种更温和、稳定且无动物来源（Animal-Origin Free）的替代方案。其不含酚红（Phenol Red-Free）的配方适用于荧光显微术（Fluorescence Microscopy）、流式细胞术（Flow Cytometry）等对染料敏感的实验。

产品特点（Key Features）

? 温和高效：模拟胰蛋白酶活性，减少细胞应激（Cell Stress），维持高存活率（Viability >90%）。
? 无动物成分（Animal-Free）：重组微生物蛋白酶（Recombinant Microbial Protease），避免病毒或朊病毒污染风险。
? 不含酚红（Phenol Red-Free）：避免干扰荧光检测或光学实验。
? 即用型（Ready-to-Use, 1X）：无需稀释，操作简便，减少批次差异（Batch-to-Batch Consistency）。
? 广谱适用性：适用于多种哺乳动物细胞（如HEK293、CHO、干细胞等）。

作用机制（Mechanism of Action）

TrypLE™ Express 含重组蛋白酶（Recombinant Protease），可特异性切割细胞表面黏附蛋白（如Integrins、Cadherins），促使细胞从培养表面解离。相较于传统胰蛋白酶：

• 更稳定：重组技术确保酶活性一致。

• 更温和：减少过度消化导致的细胞损伤。

应用场景（Applications）

?? 常规细胞传代（Cell Passaging）
?? 原代细胞（Primary Cells）和干细胞（Stem Cells）消化
?? 3D细胞培养（如类器官Organoids、肿瘤球Spheroids）的解离
?? 流式细胞术（Flow Cytometry）、qPCR等下游检测

实验方案（Protocol）

贴壁细胞消化步骤（Adherent Cell Dissociation）

1. 去除培养基：吸尽培养液，用PBS轻柔洗涤1次。

2. 加入TrypLE™ Express：覆盖细胞层（如1 mL/25 cm2）。

3. 孵育（Incubate）：37°C, 2-5分钟（显微镜下观察细胞变圆后即可终止）。

4. 终止反应：加入含血清培养基或PBS（比例≥1:1）。

5. 离心收集细胞：1000 rpm, 5分钟，重悬于新鲜培养基。

优化建议（Tips for Best Results）

?? 敏感细胞：可缩短孵育时间或用PBS稀释TrypLE™ Express（如1:1）。
?? 避免过度消化：长时间作用可能降低细胞存活率。

与传统胰蛋白酶对比（Comparison with Trypsin）