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    CCK-8 细胞活力检测试剂盒技术详解

    更新时间:2025-06-18      点击次数:111
    CCK-8 细胞活力检测试剂盒技术文章
    (一)产品概述
    CCK-8(Cell Counting Kit-8)细胞活力检测试剂盒是一种基于 WST-8(水溶性四唑盐)的高灵敏度、便捷的细胞活力检测工具。试剂盒主要包含 CCK-8 溶液、细胞培养基、阳性对照品等组分。其中,CCK-8 溶液是核心试剂,WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,可被细胞内的脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜产物,该产物的生成量与活细胞数量成正比,通过测定其在特定波长下的吸光度,即可准确反映细胞活力。
    (二)技术原理
    CCK-8 检测的原理基于细胞内脱氢酶的活性。当 CCK-8 溶液加入到含有细胞的培养体系中时,WST-8 可穿透细胞膜进入细胞内?;钕赴械南吡L逋亚饷改芄唤?WST-8 还原为橙黄色的甲臜,而死细胞由于缺乏活性的脱氢酶,无法进行该还原反应。在 450nm 波长处测定甲臜产物的吸光度,其吸光度值与活细胞数量呈良好的线性关系。通过建立标准曲线,即可根据吸光度值准确计算出细胞活力和细胞数量。与传统的 MTT 法相比,CCK-8 法生成的甲臜产物水溶性好,无需裂解细胞,避免了操作过程中因细胞裂解不等因素导致的误差,使检测结果更加准确、稳定 。
    (三)应用领域与实际案例
    1. 药物研发:在新药筛选和药物毒性评估中,CCK-8 细胞活力检测试剂盒被广泛应用。例如,在抗肿瘤药物研发过程中,科研人员将不同浓度的候选药物作用于肿瘤细胞系,一定时间后加入 CCK-8 溶液检测细胞活力。通过计算药物对细胞的半数抑制浓度(IC50),评估药物的抗肿瘤活性和毒性,为药物研发提供重要数据支持,筛选出具有潜力的候选药物。

    1. 细胞生物学研究:在细胞增殖、分化、凋亡等基础细胞生物学研究中,该试剂盒用于实时监测细胞状态。如在干细胞分化研究中,使用 CCK-8 检测不同诱导条件下干细胞的活力变化,判断细胞是否成功分化以及分化过程中细胞活力的动态变化,为揭示细胞分化机制提供依据 。

    1. 毒理学研究:在评估化学物质、环境污染物等对细胞的毒性作用时,CCK-8 法是常用的检测手段。例如,检测重金属离子对肝细胞的毒性,将肝细胞暴露于不同浓度的重金属溶液中,利用 CCK-8 试剂盒检测细胞活力,确定重金属的毒性剂量和作用机制,为环境安全评估和毒理学研究提供数据。

    (四)使用方法与注意事项
    1. 使用方法

    • 细胞接种:将对数生长期的细胞消化后,用培养基调整细胞浓度,接种到 96 孔板中,每孔加入适量细胞悬液,置于培养箱中培养。

    • 药物处理(如需):根据实验目的,向孔中加入不同浓度的药物或处理因素,继续培养一定时间。

    • CCK-8 检测:向每孔加入适量 CCK-8 溶液,轻轻混匀后,将 96 孔板放回培养箱中孵育 1-4 小时(具体时间根据细胞类型和实验条件确定)。

    • 吸光度测定:使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的吸光度值,根据标准曲线计算细胞活力和细胞数量。

    1. 注意事项

    • 试剂储存:CCK-8 试剂盒应避光保存于 4℃冰箱,避免反复冻融,否则会影响试剂活性。

    • 操作规范:实验过程中应严格遵守无菌操作原则,避免污染。加入 CCK-8 溶液时,避免产生气泡,以免影响吸光度测定。

    • 干扰因素:某些具有还原性的物质可能会与 WST-8 发生反应,影响检测结果,实验前需评估样品中是否存在此类干扰物质,并进行相应处理。

    • 对照设置:实验中应设置空白对照(只含培养基和 CCK-8 溶液)、阴性对照(正常培养的细胞)和阳性对照(已知具有细胞毒性或促进细胞生长作用的物质处理的细胞),确保实验结果的准确性和可靠性 。

    CCK-8 细胞活力检测试剂盒凭借其操作简便、灵敏度高、结果准确等优势,在生物技术多个领域发挥着重要作用。随着生物技术的不断发展,其应用场景将进一步拓展,同时也将推动相关技术的持续创新和优化 。



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