药物研发:在新药筛选和药物毒性评估中,CCK-8 细胞活力检测试剂盒被广泛应用。例如,在抗肿瘤药物研发过程中,科研人员将不同浓度的候选药物作用于肿瘤细胞系,一定时间后加入 CCK-8 溶液检测细胞活力。通过计算药物对细胞的半数抑制浓度(IC50),评估药物的抗肿瘤活性和毒性,为药物研发提供重要数据支持,筛选出具有潜力的候选药物。
细胞生物学研究:在细胞增殖、分化、凋亡等基础细胞生物学研究中,该试剂盒用于实时监测细胞状态。如在干细胞分化研究中,使用 CCK-8 检测不同诱导条件下干细胞的活力变化,判断细胞是否成功分化以及分化过程中细胞活力的动态变化,为揭示细胞分化机制提供依据 。
毒理学研究:在评估化学物质、环境污染物等对细胞的毒性作用时,CCK-8 法是常用的检测手段。例如,检测重金属离子对肝细胞的毒性,将肝细胞暴露于不同浓度的重金属溶液中,利用 CCK-8 试剂盒检测细胞活力,确定重金属的毒性剂量和作用机制,为环境安全评估和毒理学研究提供数据。
使用方法
细胞接种:将对数生长期的细胞消化后,用培养基调整细胞浓度,接种到 96 孔板中,每孔加入适量细胞悬液,置于培养箱中培养。
药物处理(如需):根据实验目的,向孔中加入不同浓度的药物或处理因素,继续培养一定时间。
CCK-8 检测:向每孔加入适量 CCK-8 溶液,轻轻混匀后,将 96 孔板放回培养箱中孵育 1-4 小时(具体时间根据细胞类型和实验条件确定)。
吸光度测定:使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的吸光度值,根据标准曲线计算细胞活力和细胞数量。
注意事项
试剂储存:CCK-8 试剂盒应避光保存于 4℃冰箱,避免反复冻融,否则会影响试剂活性。
操作规范:实验过程中应严格遵守无菌操作原则,避免污染。加入 CCK-8 溶液时,避免产生气泡,以免影响吸光度测定。
干扰因素:某些具有还原性的物质可能会与 WST-8 发生反应,影响检测结果,实验前需评估样品中是否存在此类干扰物质,并进行相应处理。
对照设置:实验中应设置空白对照(只含培养基和 CCK-8 溶液)、阴性对照(正常培养的细胞)和阳性对照(已知具有细胞毒性或促进细胞生长作用的物质处理的细胞),确保实验结果的准确性和可靠性 。