密度梯度离心原理:血液中各类细胞的密度存在差异 ,红细胞和多核白细胞比重较大,约为 1.092,而淋巴细胞和单个核细胞比重相对较小,在 1.075 左右。FICOLL PAQUE PLUS 的密度精准控制在 1.077±0.001 g/mL,这一密度恰好介于红细胞和淋巴细胞之间。当含有多种细胞的血液样本与 FICOLL PAQUE PLUS 混合后进行离心时,不同细胞会依据自身密度在离心力的作用下,在分离液中形成不同的层次,从而实现细胞的分离。
成分协同作用:其主要成分包括 9.0% (w/v) 的泛影葡胺钠、5.7% (w/v) 的 Ficoll PM400 以及 0.0231%(w/v) 的依地酸钙钠 。泛影葡胺钠可增加溶液的密度,有助于形成稳定的密度梯度;Ficoll PM400 作为一种高分子量蔗糖聚合物,能促进红细胞的凝集,使得红细胞在离心过程中更容易沉淀,从而与淋巴细胞更好地分离;依地酸钙钠则起到抗凝作用,防止血液样本在分离过程中发生凝固,保证细胞的完整性和活性。
高纯度与高回收率:使用 FICOLL PAQUE PLUS 分离淋巴细胞,所得单核细胞含量可达 95 ±5% ,淋巴细胞得率为 60 ± 20%。这意味着科研人员能够从外周血样本中获取到高纯度的淋巴细胞,且细胞的回收率较高,为后续实验提供了充足且优质的细胞材料。无论是进行淋巴细胞功能研究,还是基于淋巴细胞的细胞治疗探索等,高纯度和高回收率的淋巴细胞样本都至关重要,能有效减少杂质细胞对实验结果的干扰,提高实验的准确性和可靠性。
良好的细胞活力维持:该产品在分离过程中能很好地维持淋巴细胞的活力 ,细胞存活率可达 95 ±5%。这得益于其温和的分离条件以及对细胞无明显毒性的成分。高活力的淋巴细胞对于需要细胞继续进行培养、增殖或功能检测的实验尤为关键,如淋巴细胞的体外刺激实验、细胞因子分泌检测等,只有保持细胞的高活力,才能真实反映淋巴细胞在生理状态下的功能和特性。
低内毒素水平:FICOLL PAQUE PLUS 的内毒素水平极低,小于 0.12 EU/mL 。内毒素的存在可能会对细胞产生毒性作用,影响细胞的正常生理功能,进而干扰实验结果。低内毒素水平保证了分离得到的淋巴细胞不受内毒素的污染和干扰,对于一些对内毒素敏感的实验,如细胞培养、免疫细胞功能研究等,能够提供更纯净、可靠的细胞样本,确保实验结果的准确性和可重复性。
操作简便快速:基于 Boyum 发展的方法,使用 FICOLL PAQUE PLUS 进行淋巴细胞分离仅需简单快速的离心操作 ??蒲腥嗽敝恍杞柿康难貉拘⌒钠碳釉?FICOLL PAQUE PLUS 分离液上方,然后放入离心机中,按照推荐的离心条件进行离心,即可实现细胞的分层分离。整个操作过程无需复杂的设备和繁琐的步骤,即使是实验新手也能快速上手,大大提高了实验效率,节省了科研时间。
对比维度 | FICOLL PAQUE PLUS | 红细胞裂解液法 | 流式细胞分选法 | 磁珠分选法 |
分离纯度 | 单核细胞含量 95 ±5% | 纯度较低,易残留杂质 | 纯度高,但可能存在损失 | 纯度较高,特异性强 |
细胞活力 | 存活率 95 ±5% | 对细胞有一定损伤 | 操作复杂,影响活力 | 可能影响细胞功能 |
操作难度 | 简单,仅需离心 | 步骤相对复杂 | 需专业设备与技术 | 需特定设备与操作 |
分离时间 | 较短 | 中等 | 较长 | 中等 |
成本 | 适中 | 较低 | 设备昂贵,成本高 | 磁珠成本较高 |
适用场景 | 常规实验 | 对纯度要求不高的实验 | 高纯度特殊需求实验 | 特定细胞亚群分离 |
免疫学研究:在免疫学研究中,淋巴细胞是核心研究对象 。FICOLL PAQUE PLUS 分离得到的高纯度、高活力淋巴细胞,可用于研究淋巴细胞的免疫应答机制,如 T 细胞和 B 细胞的活化、增殖、分化过程,以及它们在免疫防御、免疫调节中的作用。通过对淋巴细胞的深入研究,有助于揭示免疫系统的工作原理,为开发新型免疫治疗方法、疫苗等提供理论基础。例如,在肿瘤免疫治疗研究中,分离出的淋巴细胞可用于体外扩增和修饰,使其具备更强的抗肿瘤活性,再回输到患者体内,以达到治疗肿瘤的目的。
传染病研究:在传染病研究领域,淋巴细胞在机体对抗病原体感染的过程中发挥着重要作用 。利用 FICOLL PAQUE PLUS 分离患者外周血中的淋巴细胞,可用于研究淋巴细胞对病原体的免疫反应,包括淋巴细胞分泌细胞因子的类型和水平、淋巴细胞对病原体的杀伤能力等。这有助于深入了解传染病的发病机制,为开发针对性的治疗药物和疫苗提供关键线索。例如,在艾滋病研究中,通过对 HIV 感染者淋巴细胞的研究,可探索 HIV 病毒如何感染淋巴细胞以及淋巴细胞如何抵抗病毒感染,为寻找有效的艾滋病治疗方法提供方向。
血液学研究:在血液学研究中,淋巴细胞的数量和功能变化与多种血液疾病密切相关 。FICOLL PAQUE PLUS 可用于从患者血液样本中分离淋巴细胞,用于分析淋巴细胞在白血病、淋巴瘤等血液肿瘤中的异常表现,如细胞形态、免疫表型、基因表达等方面的变化。通过对这些异常的研究,有助于血液疾病的诊断、分型和预后评估,同时也为开发新的治疗策略提供依据。例如,在白血病的诊断和治疗监测中,准确分离和分析淋巴细胞的变化,对于判断病情进展和治疗效果具有重要意义。
样本准备:使用 FICOLL PAQUE PLUS 时,建议使用新鲜采集的人外周血样本 。采血过程应严格遵循无菌操作原则,使用无热原、无内毒素的采血器材。采集后的血液样本若不能立即进行分离,可在室温下短暂保存,但不宜超过数小时,以免影响细胞活性和分离效果。若需长时间保存,可采用适当的抗凝剂处理后,在低温下保存,但应注意保存条件对细胞的影响。
实验操作流程:操作时,先将 FICOLL PAQUE PLUS 分离液小心转移至离心管中,注意不要产生气泡 。然后用移液器将稀释后的血液样本缓慢铺加在分离液上方,形成清晰的界面。血液与分离液的体积比推荐为 2:3 。将离心管放入离心机中,按照推荐的离心条件(如室温下,以特定转速离心一定时间,具体参数可参考产品说明书)进行离心。离心结束后,可观察到明显的细胞分层,位于分离液界面上的白膜层即为富含淋巴细胞的单个核细胞层。使用移液器小心吸取该层细胞,转移至新的离心管中,再通过适当的洗涤步骤去除残留的分离液和杂质,即可获得相对纯净的淋巴细胞。
存储条件:为保证 FICOLL PAQUE PLUS 的性能,应将其存储于 4 - 30℃的环境中 。避免阳光直射和高温环境,防止产品变质。在使用过程中,要注意产品的有效期,尽量在有效期内使用,以确保实验结果的可靠性??夂蟮牟酚】焓褂?,并妥善保存剩余部分,防止微生物污染。若发现产品出现浑浊、沉淀或颜色异常等情况,请勿使用。