如何判断SDS-PAGE电泳实验中凝胶制备是否成功？

外观检查

• 凝胶透明度：成功制备的凝胶应具有良好的透明度，质地均匀，无明显的浑浊、颗?；蛱跷?。如果凝胶出现发白、不透明的情况，可能是由于凝胶未充分聚合、试剂不纯或含有杂质等原因导致。

• 表面平整度：凝胶表面应平整光滑，无气泡、凹陷或凸起。若表面不平整，会影响样品在凝胶中的迁移路径，导致条带变形或不均匀。

• 边缘完整性：凝胶边缘应整齐，与电泳槽壁紧密贴合，无漏胶现象。若边缘不完整或有漏胶，会使凝胶在电泳过程中出现电场不均匀，影响分离效果。

• 凝胶硬度和弹性：用手指轻轻按压凝胶表面，成功的凝胶应具有一定的硬度和弹性，能够承受一定的压力而不破裂或变形。如果凝胶太软，可能是聚合，需要延长聚合时间或检查引发剂和加速剂的用量；如果凝胶太硬、易碎，则可能是丙烯酰胺浓度过高或交联剂比例不当。

• 电泳测试

• 指示剂迁移：在加入样品进行电泳时，观察指示剂（如溴酚蓝）的迁移情况。如果指示剂能够均匀、快速地向阳极移动，形成一条清晰的蓝色条带，说明凝胶的导电性和孔径分布均匀，凝胶制备基本成功。若指示剂出现拖尾、分叉或迁移速度异常，则可能是凝胶存在问题。

• 蛋白条带分离：对于已知分子量的标准蛋白样品，在电泳后应能按照其分子量大小在凝胶上呈现出清晰、分离良好的条带。如果条带清晰、整齐，没有明显的弥散、扭曲或重叠现象，说明凝胶的分辨率较高，能够有效地分离不同分子量的蛋白质，凝胶制备较为成功。反之，如果条带模糊、无法分辨，可能是凝胶的孔径不合适、聚合不均匀或样品处理不当等原因所致。