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    DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂用户指南

    更新时间:2025-04-25      点击次数:220

    DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂用户指南

    ——精准定量Western Blot总蛋白,提升实验可靠性的金标准工具

    一、产品概述

    DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂是一款基于膜(转膜后)的标准化策略,专为Western Blot实验设计。该试剂可对样品中的所有蛋白质进行染色,并通过Odyssey成像系统在700 nm通道中检测,实现总蛋白的线性定量分析。相比传统看家蛋白(如β-actin、GAPDH)归一化方法,Revert™试剂可避免生物学变异的影响,显著提高Western Blot定量分析的准确性和重复性。

    二、核心参数与特性


    参数详情
    适用范围Western Blot总蛋白定量分析
    线性范围1-60 μg总蛋白(覆盖大多数细胞裂解物浓度)
    检测通道Odyssey成像系统700 nm通道(兼容Revert 700试剂)或520 nm通道(Revert 520试剂)
    操作时间总染色时间<10分钟
    兼容性与PVDF或硝酸纤维素膜兼容,无需特殊凝胶或试剂
    试剂组成1×100 mL染色液、1×200 mL清洗液、1×200 mL逆转液


    产品优势

    1. 高线性范围

      • 在1-60 μg总蛋白范围内提供线性信号,优于看家蛋白(如β-actin在20 μg以上时信号饱和)。

      • 示例:Jurkat细胞裂解液(10 μg/道)在4-12% Bis-Tris凝胶中分离后,Revert 700试剂在700 nm通道的信号强度与蛋白浓度呈强线性相关(R2>0.99)。

    2. 快速高效

      • 染色过程<10分钟,显著缩短实验时间。

      • 无需额外设备或特殊凝胶,可直接融入现有Western Blot流程。

    3. 避免生物学变异

      • 总蛋白归一化不受细胞类型、生长条件或发育阶段的影响。

      • 示例:小鼠不同组织(肌肉、心脏、脾脏)中β-actin表达差异显著(CV=36.6%),而Revert试剂归一化后数据一致性显著提高。

    三、应用场景

    1. Western Blot标准化

      • 纠正上样量或转膜效率的差异,提高定量准确性。

      • 示例:通过Revert试剂归一化后,不同样本的目标蛋白表达差异从原始数据的2.3倍降低至1.1倍。

    2. 多组织/多细胞系比较

      • 适用于跨组织或跨细胞系的蛋白表达分析,避免看家蛋白表达不稳定导致的偏差。

    3. 药物筛选与机制研究

      • 在高通量筛选中提供稳定的总蛋白归一化参考,确保实验结果的可靠性。

    四、操作指南

    (一)使用方法
    1. 转膜后处理

      • 将转膜后的PVDF或硝酸纤维素膜置于托盘中,用Q-water清洗3次,每次5分钟。

    2. 染色

      • 加入Revert 700染色液,室温孵育5-10分钟(根据膜类型调整时间)。

    3. 清洗

      • 用Revert清洗液清洗3次,每次5分钟,去除未结合的染色剂。

    4. 逆转

      • 加入Revert逆转液,室温孵育5分钟,终止染色反应。

    5. 成像

      • 使用Odyssey CLx成像系统在700 nm通道扫描膜,获取总蛋白信号。

    (二)实验建议


    步骤注意事项
    膜选择推荐使用Immobilon®-FL PVDF膜,可提升信号强度和背景清晰度
    染色时间优化对于低丰度蛋白样本,可延长染色时间至10分钟
    多通道检测可在同一膜上依次进行Revert 700(700 nm)和目标蛋白(800 nm)的成像
    数据分析使用Image Studio软件进行总蛋白与目标蛋白信号的定量分析


    (三)常见问题
    1. Q:背景信号过高?
      A:检查清洗步骤是否充分,或缩短染色时间。

    2. Q:信号强度不足?
      A:确认膜类型是否兼容,或延长染色时间至10分钟。

    3. Q:不同批次试剂信号差异大?
      A:确保试剂储存条件(-20°C,避免反复冻融),并使用同一批次试剂进行实验。

    五、技术对比与选型建议


    特性Revert™总蛋白染色传统看家蛋白归一化
    线性范围1-60 μg受看家蛋白表达稳定性限制
    操作时间<10分钟需额外检测看家蛋白,耗时更长
    生物学变异影响受细胞类型、生长条件影响显著
    适用场景跨组织/多细胞系比较、高通量筛选常规Western Blot验证


    选型建议

    • 高精度需求:优先选择Revert 700试剂(货号:926-11015),适用于700 nm通道成像。

    • 多通道检测:可搭配Revert 520试剂(货号:926-11023)进行520 nm通道成像。

    • 经济型选择:Revert Total Protein Stain Kit(货号:926-11007)包含全套试剂,适合中小规模实验。

    六、维护与储存

    1. 储存条件

      • -20°C避光保存,避免反复冻融(建议分装后使用)。

      • 有效期:自收到货起2年。

    2. 废弃处理

      • 废弃试剂需按照实验室化学品处理规定进行,建议收集在专用废液容器中。



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