Chromotek实验免疫试剂盒用户指南

Chromotek实验免疫试剂盒用户指南

——精准捕获，赋能蛋白研究

一、产品概述

Chromotek公司成立于2008年，是纳米抗体（Nanobody®）技术的全球，其开发的GFP-Trap®、RFP-Trap®等试剂盒已成为荧光蛋白标记蛋白研究的金标准。通过将纳米抗体与琼脂糖珠、磁珠等基质偶联，Chromotek试剂盒可高效、特异性地富集目标蛋白，广泛应用于免疫沉淀（IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫荧光（IF）等实验。

二、核心优势

1. 高亲和力与特异性

• 解离常数（KD）：GFP-Trap®与GFP的KD值低至1 pM，远低于传统抗体（nM级）。

• 交叉反应：与山羊、小鼠、大鼠或人抗体无显著同源性，避免非特异性结合。

2. 操作便捷性

• 磁珠/琼脂糖珠双选择：磁珠（如GFP-Trap®_M）支持磁力分离，琼脂糖珠（如GFP-Trap®_A）适用于离心操作。

• 一步法洗脱：通过95°C SDS-PAGE缓冲液或甘氨酸-HCl（pH 2.5）快速洗脱，无需复杂步骤。

3. 应用场景多样性

• IP/Co-IP：验证蛋白-蛋白相互作用。

• ChIP：研究DNA-蛋白结合。

• IF/IHC：细胞/组织定位分析。

• Pull-down：体外蛋白相互作用筛选。

三、热门产品及应用领域

应用示例：

• 蛋白相互作用研究：使用GFP-Trap®_A从HEK293细胞中富集GFP-Bub1融合蛋白，通过质谱分析鉴定纺锤体组装检查点相关蛋白。

• 表观遗传学：利用Dnmt1-Trap®研究DNA甲基化在DNA修复中的作用。

• 超分辨率成像：结合GFP-Booster，在STORM显微镜下实现GFP标签蛋白的纳米级定位。

四、技术参数与操作指南

（一）产品规格

• 形式：预偶联琼脂糖珠/磁珠

• 规格：250 μg抗体（如GFP-Trap® gt-250）、20次反应（如GFP-Trap®_A gta-20）

• 储存条件：4°C（短期）、-20°C（长期），避免反复冻融

（二）操作步骤（以GFP-Trap®_A为例）

1. 细胞裂解

• 收获细胞，加入预冷裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上孵育30分钟。

• 14,000 × g离心10分钟，取上清。

2. 免疫沉淀

• 平衡GFP-Trap®_A：用稀释缓冲液洗涤2次。

• 加入细胞裂解液，4°C旋转孵育1小时。

• 磁力分离或离心，弃上清。

3. 洗涤

• 用洗涤缓冲液洗涤3次，可选增加盐浓度（150-500 mM NaCl）以提高特异性。

4. 洗脱

• 方案一：95°C SDS-PAGE缓冲液煮沸10分钟。

• 方案二：0.2 M甘氨酸-HCl（pH 2.5）孵育30秒，立即中和。

5. 分析

• SDS-PAGE、Western Blot或质谱分析。

（三）注意事项

• 避免非特异性结合：洗涤时确保洗涤缓冲液充分覆盖珠子。

• 洗脱条件优化：对于敏感蛋白，可降低甘氨酸-HCl浓度或缩短孵育时间。

• 磁珠使用：磁力分离后，用移液器小心去除残留液体，避免珠子损失。

五、常见问题与解决方案

六、质量保证与认证

• 严格质检：每批次试剂盒需通过ELISA、SPR、SDS-PAGE等多项检测。

• ISO 9001认证：生产流程符合国际质量管理标准。

• 数据支持：提供完整的产品说明书、CoA（质检报告）及文献引用。