Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯用户指南

Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯用户指南

——精准电转化，助力基因编辑与细胞工程

一、产品概述

Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯（MicroPulser Electroporation Cuvettes）是专为高场强电穿孔设计的实验室耗材，适用于酵母、细菌及其他真核细胞的基因导入与编辑。其核心优势包括高转化效率、无菌保障及结构稳定性，广泛应用于分子生物学、合成生物学及药物研发领域。

二、技术参数

三、核心功能与优势

1. 高转化效率

• 窄间距设计：0.2 cm间距产生高场强，显著提升外源DNA/RNA的细胞摄取率。

• 精准公差控制：电极间距误差极小，确保实验结果的可重复性。

2. 无菌保障

• 净室生产：装配、洗涤、加盖、包装全流程在净室完成，避免污染。

• Gamma射线灭菌：独立包装，开袋即用，无需额外灭菌步骤。

3. 结构稳定性

• 耐高压聚碳酸酯：可承受电穿孔仪的高电压脉冲，避免击穿或泄漏。

• 无缝模制腔体：避免渗漏，确保铝板平行，保障脉冲均匀性。

4. 操作便捷性

• 颜色编码盖帽：绿色标识0.2 cm间距，便于快速区分不同规格电击杯。

• 平滑电极表面：11步蚀刻处理，确保脉冲传送一致性，减少细胞损伤。

四、操作指南

（一）实验前准备

1. 设备检查

• 确认电穿孔仪（如Gene Pulser Xcell）与电击杯型号匹配。

• 检查电击杯包装完整性，避免使用已开封或损坏的产品。

2. 细胞处理

• 制备感受态细胞（如酵母、细菌），浓度建议为1–10×10?细胞/mL。

• 加入目的DNA（如质粒），混匀后冰浴5分钟。

3. 电击杯预冷

• 将电击杯插入冰中预冷5分钟，减少电转过程中的热损伤。

（二）电穿孔操作

1. 样品加载

• 用200 μL枪头（切除0.5 cm）将细胞-DNA混合物缓慢注入电击杯，避免气泡。

• 立即盖上杯盖，确保密封性。

2. 参数设置

• 酵母：电压170 V，电容950 μF，电转液100 μL。

• 细菌：电压150 V，电容950 μF，电转液100 μL。

• 哺乳动物细胞（需优化）：电压80–160 V，电容800–1000 μF。

• 根据细胞类型选择参数（示例）：

3. 电击与复苏

• 将电击杯放入电穿孔仪，启动脉冲。

• 电击后立即加入预冷培养基，转移至离心管中复苏。

（三）实验后处理

1. 电击杯清洁

• 用去离子水或70%乙醇冲洗内腔，避免细胞碎片残留。

• 重复使用可能导致转化效率下降，建议单次使用后丢弃。

2. 细胞培养

• 根据细胞类型选择复苏条件（如37℃培养箱、抗生素筛?。?。

• 孵育12–48小时后，检测基因表达或编辑效率。

五、典型应用场景

1. 基因编辑

• CRISPR/Cas9：通过电穿孔将sgRNA与Cas9质粒导入酵母或细菌，实现基因敲除或敲入。

• 同源重组：结合供体DNA（donor DNA），进行高精度基因编辑。

2. 细胞工程

• 重组蛋白表达：将外源基因导入酵母或细菌，生产治疗性蛋白。

• 干细胞转染：优化参数后，用于哺乳动物细胞的基因导入。

3. 合成生物学

• 代谢通路改造：通过电穿孔导入多基因质粒，构建高效代谢工程菌株。

六、注意事项

1. 无菌操作

• 电击杯开盖后需立即使用，避免暴露于空气中过久。

• 使用后需按制造商说明清洁消毒，防止交叉污染。

2. 参数优化

• 不同细胞类型需调整电压、电容及电转液体积。

• 建议参考Bio-Rad参数表或文献进行优化。

3. 设备兼容性

• 确认电穿孔仪支持0.2 cm间距电击杯（如Gene Pulser系列）。

• 避免使用非兼容设备，以免损坏电击杯或仪器。

4. 储存条件

• 未开封电击杯可室温储存，避免高温或潮湿环境。

• 已开封电击杯需立即使用，或密封保存于4℃。