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    Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯用户指南

    更新时间:2025-04-24      点击次数:245

    Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯用户指南

    ——精准电转化,助力基因编辑与细胞工程

    一、产品概述

    Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm间距电击杯(MicroPulser Electroporation Cuvettes)是专为高场强电穿孔设计的实验室耗材,适用于酵母、细菌及其他真核细胞的基因导入与编辑。其核心优势包括高转化效率、无菌保障及结构稳定性,广泛应用于分子生物学、合成生物学及药物研发领域。

    二、技术参数


    参数规格
    电极间距0.2 cm(窄间距,高场强)
    材质杯体:聚碳酸酯(PC);电极:铝片(11步蚀刻处理)
    适用细胞类型酵母、细菌、哺乳动物细胞(需优化参数)
    无菌保障净室环境装配,Gamma射线灭菌,独立包装
    包装规格500个/包(单杯重量未标注,需按需分装)
    兼容性Gene Pulser MXcell™、Gene Pulser Xcell™、Gene Pulser II等电穿孔仪


    三、核心功能与优势

    1. 高转化效率

      • 窄间距设计:0.2 cm间距产生高场强,显著提升外源DNA/RNA的细胞摄取率。

      • 精准公差控制:电极间距误差极小,确保实验结果的可重复性。

    2. 无菌保障

      • 净室生产:装配、洗涤、加盖、包装全流程在净室完成,避免污染。

      • Gamma射线灭菌:独立包装,开袋即用,无需额外灭菌步骤。

    3. 结构稳定性

      • 耐高压聚碳酸酯:可承受电穿孔仪的高电压脉冲,避免击穿或泄漏。

      • 无缝模制腔体:避免渗漏,确保铝板平行,保障脉冲均匀性。

    4. 操作便捷性

      • 颜色编码盖帽:绿色标识0.2 cm间距,便于快速区分不同规格电击杯。

      • 平滑电极表面:11步蚀刻处理,确保脉冲传送一致性,减少细胞损伤。

    四、操作指南

    (一)实验前准备
    1. 设备检查

      • 确认电穿孔仪(如Gene Pulser Xcell)与电击杯型号匹配。

      • 检查电击杯包装完整性,避免使用已开封或损坏的产品。

    2. 细胞处理

      • 制备感受态细胞(如酵母、细菌),浓度建议为1–10×10?细胞/mL。

      • 加入目的DNA(如质粒),混匀后冰浴5分钟。

    3. 电击杯预冷

      • 将电击杯插入冰中预冷5分钟,减少电转过程中的热损伤。

    (二)电穿孔操作
    1. 样品加载

      • 用200 μL枪头(切除0.5 cm)将细胞-DNA混合物缓慢注入电击杯,避免气泡。

      • 立即盖上杯盖,确保密封性。

    2. 参数设置

      • 酵母:电压170 V,电容950 μF,电转液100 μL。

      • 细菌:电压150 V,电容950 μF,电转液100 μL。

      • 哺乳动物细胞(需优化):电压80–160 V,电容800–1000 μF。

      • 根据细胞类型选择参数(示例):

    3. 电击与复苏

      • 将电击杯放入电穿孔仪,启动脉冲。

      • 电击后立即加入预冷培养基,转移至离心管中复苏。

    (三)实验后处理
    1. 电击杯清洁

      • 用去离子水或70%乙醇冲洗内腔,避免细胞碎片残留。

      • 重复使用可能导致转化效率下降,建议单次使用后丢弃。

    2. 细胞培养

      • 根据细胞类型选择复苏条件(如37℃培养箱、抗生素筛?。?。

      • 孵育12–48小时后,检测基因表达或编辑效率。

    五、典型应用场景

    1. 基因编辑

      • CRISPR/Cas9:通过电穿孔将sgRNA与Cas9质粒导入酵母或细菌,实现基因敲除或敲入。

      • 同源重组:结合供体DNA(donor DNA),进行高精度基因编辑。

    2. 细胞工程

      • 重组蛋白表达:将外源基因导入酵母或细菌,生产治疗性蛋白。

      • 干细胞转染:优化参数后,用于哺乳动物细胞的基因导入。

    3. 合成生物学

      • 代谢通路改造:通过电穿孔导入多基因质粒,构建高效代谢工程菌株。

    六、注意事项

    1. 无菌操作

      • 电击杯开盖后需立即使用,避免暴露于空气中过久。

      • 使用后需按制造商说明清洁消毒,防止交叉污染。

    2. 参数优化

      • 不同细胞类型需调整电压、电容及电转液体积。

      • 建议参考Bio-Rad参数表或文献进行优化。

    3. 设备兼容性

      • 确认电穿孔仪支持0.2 cm间距电击杯(如Gene Pulser系列)。

      • 避免使用非兼容设备,以免损坏电击杯或仪器。

    4. 储存条件

      • 未开封电击杯可室温储存,避免高温或潮湿环境。

      • 已开封电击杯需立即使用,或密封保存于4℃。



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