蛋白快速染液（免脱色）科研应用指南

——高效、灵敏的蛋白检测解决方案

一、产品原理与核心优势

1.1 技术原理

荧光/比色双模式检测：

含特殊染料（如SYPRO Ruby或Coomasie衍生物），可逆性结合蛋白的 疏水区域

线性动态范围：0.5-50 ng/band（比传统考马斯亮蓝灵敏10倍）

免脱色设计：

染色-洗涤一步完成（省去甲醇/乙酸脱色步骤）

兼容下游质谱分析（无醛类交联剂）

1.2 关键性能对比

参数免脱色染液传统考马斯亮蓝银染

检测时间15分钟2小时+脱色过夜4小时

灵敏度0.5 ng10 ng0.1 ng

质谱兼容性优秀差中等

1.3 适用场景

推荐用途：

? SDS-PAGE/WB快速质检

? 低丰度蛋白可视化

? 高通量筛选实验

二、标准化操作流程

2.1 染色步骤

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1. 电泳后凝胶处理：  

   - 去除SDS：用超纯水漂洗2×5分钟  

2. 染色：  

   - 加入染液（覆盖凝胶），室温摇床孵育10分钟  

3. 洗涤：  

   - 换超纯水摇洗5分钟（去除背景）  

4. 成像：  

   - 蓝光激发（SYPRO Ruby）或直接可见光观察  

2.2 注意事项

凝胶厚度：建议≤1 mm（过厚凝胶需延长染色5分钟）

染色液回收：可重复使用3次（灵敏度下降≤20%）

三、数据解读与优化

3.1 结果判读标准

阳性信号：清晰条带（无横向拖尾）

背景控制：凝胶非蛋白区域接近无色

3.2 常见问题排查

现象可能原因解决方案

条带模糊SDS未去除延长水洗至10分钟

背景过高染色时间过长缩短至5-7分钟

信号弱蛋白量不足/染料失效增加上样量/更换新染液

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否用于Native-PAGE？

需改用 非变性专用染液（如F90100NT），避免SDS干扰

Q2：染色后能否回收蛋白？

可切胶进行 胶内酶解（需用50mM NH?HCO?充分洗涤）

文档优化建议：

插入 【染色效果对比图】（标记不同灵敏度）

添加 染色时间计算器 二维码（根据凝胶厚度调整）

关键步骤标注 ??警示（如"避免金属器皿接触"）